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宝锐LAMP系列|分子POCT诊断试剂的理想选择——更快速!真高效!

2021-12-23 22:10:26
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新冠疫情背景下,大规模的基层检测需求,推动了分子POCT进入发展快车道,迅速登上诊断舞台。分子诊断POCT技术集成了分子诊断技术和POCT技术,与传统的qPCR都具有快速、高灵敏度和特异性等优势,同时又突破了现有检测技术对人员/场所的限制,有效缩短检测用时。

面对突发重大疫情,POCT核酸检测可应用于更多场景,实现患者的现场及时检测。 环介导恒温扩增(LAMP),是2000年由日本荣研化学株式会社开发的一种恒温核酸扩增技术,近十几年来,已成为一种适用于分子POCT平台的理想方法。此技术能在恒温(60-65℃)条件下,一小时内即可完成核酸的扩增,具有特异性强、灵敏度高、反应快速以及不依赖特殊仪器设备等优势。


烧脑的技术原理:环介导恒温扩增技术的核心是同时具备聚合酶活性和链置换活性的DNA聚合酶(Bst DNA聚合酶)。反应过程主要分两个阶段,第 一为起始结构产生阶段,利用内引物和外引物特异性识别目标序列的6个不同位点,外引物延伸引发的链置换反应可将内引物延伸产生的单链DNA置换出来,由于内引物的5’端与目标序列的其中一段反向互补,因此被置换出的单链DNA能形成茎环结构,两端茎环构成的哑铃状结构为第二阶段的起始结构。茎环结构的形成是反应能顺利进行的关键,也是环介导恒温扩增技术名字的由来。第二阶段为循环扩增阶段,首先茎环结构的3’末端自身配对延伸,随后内引物与茎环区域结合延伸,并由于另一端茎环结构的自身配对延伸而被置换出来,然后按照这样自身配对延伸和内引物-茎环配对延伸不断循环扩增。LAMP的扩增速度非常快,能在1小时内达到10⁹拷贝,如果在原始的4条引物的基础上,再添加2条环引物,将大大缩短扩增反应时间。



宝锐目前已开发了针对DNA模板的LAMP染料法检测试剂盒和LAMP PH指示剂法检测试剂盒,以及针对RNA模板的一步法RT-LAMP染料法检测试剂盒和RT-LAMP PH指示剂法检测试剂盒。缓冲液体系经过优化,可有效地提高扩增反应速度和产量,且稳定性良好。

image.png


宝锐生物LAMP系列之

染料法检测试剂盒

(快速/高效/稳定)

荧光染料法常用的荧光染料包括SYBR Green I、Eva Green等。

image.png

/01、LAMP染料法检测试剂盒检测λDNA

实验条件:

仪器

SLAN-96P

体系

DNA-LAMP染料法扩增体系

模板

λDNA

模板加量

0.05pg/T0.5pg/T5pg/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

注:0.05pg λDNA约为1个拷贝。

实验结果:

 image.png

注:红色、紫色、蓝色分别代表5pg/T、0.5pg/T、0.05pg/T的λDNA模板加量。


/02、RT-LAMP染料法检测试剂盒检测人总RNA中 β-actin基因

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

RT-LAMP染料法扩增体系

模板

人总RNA

模板加量

0.01ng/T0.1ng/T1ng/T10ng/T100ng/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

实验结果

image.png 

注:红色、黄色、蓝色、绿色、紫色分别代表100ng/T、10ng/T、1ng/T、0.1ng/T、0.01ng/T的人总RNA模板加量

image.png


Ø 冻融稳定性

非冻干体系

/01、λDNA测试非冻干体系冻融稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

LAMP染料法扩增体系

模板

λDNA

模板加量

0.05pg/T、0.5pg/T、5pg/T

反应程序

65℃,60min(每分钟采集荧光),95℃,2min

实验结果

                    冻融5                             冻融10次                             冻融15次

image.pngimage.pngimage.png

注:蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为:5pg/T、0.5pg/T 、0.05pg/T。


/02、β-actin基因测试非冻干体系冻融稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

RT-LAMP染料法扩增体系

模板

人总RNA

模板加量

1ng/T、10ng/T、100ng/T

反应程序

65℃,60min(每分钟采集荧光),95℃,2min

实验结果

                  冻融5                            冻融10次                            冻融15次

image.pngimage.pngimage.png

注:蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为:100ng/T、10ng/T、1ng/T。


可冻干体系

/01、λDNA测试可冻干体系冻融稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

LAMP染料法扩增体系DG

模板

λDNA

模板加量

0.05pg/T0.5pg/T5pg/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

实验结果

                 冻融5                              冻融10次                              冻融15次

image.pngimage.pngimage.png

注:蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为:5pg/T、 0.5pg/T 、 0.05pg/T。


/02、β-actin基因测试可冻干体系冻融稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

RT-LAMP染料法扩增体系DG

模板

人总RNA

模板加量

1ng/T10ng/T100ng/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

实验结果

                  冻融5                            冻融10次                              冻融15次

image.pngimage.pngimage.png

注:蓝色为非冻融试剂、红色为冻融试剂。模板加量从左到右为:100ng/T、10ng/T、1ng/T


Ø 加速稳定性

非冻干体系

/01、λDNA测试非冻干体系37℃加速稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

LAMP染料法扩增体系

模板

λDNA

模板加量

0.05pg/T0.5pg/T5pg/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

实验结果

                                                      37加速6

image.png

注:蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为:5pg/T、0.5pg/T 、0.05pg/T。


/02、β-actin基因测试非冻干体系37℃加速稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

RT-LAMP染料法扩增体系

模板

人总RNA

模板加量

1ng/T、10ng/T、100ng/T

反应程序

65℃,60min(每分钟采集荧光),95℃,2min

实验结果

                                                            37加速6

image.png

注:蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为:100ng/T、10ng/T、1ng/T。


可冻干体系

/01、λDNA测试可冻干体系37℃加速稳定性

仪器

SLAN-96P

体系

LAMP染料法扩增体系(DG

模板

λDNA

模板加量

0.05pg/T0.5pg/T5pg/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

实验条件

                                                                 37加速7

image.png

注:蓝色为4℃保存的试剂、红色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为:5pg/T、 0.5pg/T 、 0.05pg/T。


/02、β-actin基因测试可冻干体系37℃加速稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

RT-LAMP染料法扩增体系(DG

模板

人总RNA

模板加量

1ng/T10ng/T100ng/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

 实验结果

                                                                          37加速7

image.png

注:色为4℃保存的试剂、色为37℃加速的试剂。模板加量从左到右为:100ng/T、10ng/T、1ng/T。


冻干粉

/01、λDNA检测DNA-LAMP冻干粉55℃加速稳定性

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

DNA-LAMP冻干体系

模板

λDNA

模板加量

0.05pg/T0.5pg/T5pg/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

实验结果

                                                                        55加速30

image.png

注:蓝色为同批次液体试剂、红色为55℃加速30天的冻干粉。模板加量从左到右为:5pg/T、0.5pg/T、0.05pg/T。


加速前后试剂冻干形态对比

image.png image.png

冻干后                            55加速30


/02、β-actin基因检测RT-LAMP冻干粉55℃加速稳定性

 

实验条件

仪器

SLAN-96P

体系

RT-LAMP冻干体系

模板

人总RNA

模板加量

1ng/T10ng/T100ng/T

反应程序

65℃60min(每分钟采集荧光),95℃2min

 实验结果 

                                                                  55加速30

image.png

注:蓝色为同批次液体试剂、红色为55℃加速30天的冻干粉。模板加量从左到右为:100ng/T、10ng/T、1ng/T。

加速前后试剂冻干形态对比

image.png image.png

冻干后                       55加速30

 

恒温扩增Premix产品

序号

产品名称

货号

1

2×Lamp PremixR01)染料法

HW201-R01

2

2×Lamp PremixM01/M02)目视法

HW201-M01*/M02*

3

Lamp PremixR01)(DG)染料法可冻干

FHW1001-R01

4

Lamp PremixM01/M02)(DG)目视法可冻干

FHW1001-M01/M02

5

2×RT Lamp PremixR01)染料法

HW202-R01

6

2×RT Lamp PremixM01/M02)目视法

HW202-M01/M02

7

RT Lamp PremixR01)(DG)染料法可冻干

FHW1002-R01

8

RT Lamp PremixM01/M02)(DG)目视法可冻干

FHW1002-M01/M02

* M01表示红黄变色;*M02表示黄绿变色。


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